Direct interaction between EgFABP1, a fatty acid binding protein from Echinococcus granulosus, and phospholipid membranes.

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Direct Interaction between EgFABP1, a Fatty Acid Binding Protein from Echinococcus granulosus, and Phospholipid Membranes Jorge L. Porfido1,2., Gabriela Alvite3., Valeria Silva1,2, Malcolm W. Kennedy4, Adriana Esteves3, Betina Corsico1,2* 1 Instituto de Investigaciones Bioquı́micas de La Plata, Facultad de Ciencias Médicas, Universidad Nacional de La Plata, La Plata, Buenos Aires, Argentina, 2 Consejo Nacional de Investigaciones Cientı́ficas y Técnicas (CONICET), Ciudad Autónoma de Buenos Aires, Argentina, 3 Sección Bioquı́mica, Facultad de Ciencias, Universidad de la República, Montevideo, Uruguay, 4 Institute of Molecular, Cell and Systems Biology, and Institute of Biodiversity, Animal Health and Comparative Medicine, College of Medical, Veterinary and Life Sciences, University of Glasgow, Glasgow, United Kingdom Abstract Background: Growth and maintenance of hydatid cysts produced by Echinococcus granulosus have a high requirement for host lipids for biosynthetic processes, membrane building and possibly cellular and developmental signalling. This requires a high degree of lipid trafficking facilitated by lipid transporter proteins. Members of the fatty acid binding protein (FABP) family have been identified in Echinococcus granulosus, one of which, EgFABP1 is expressed at the tegumental level in the protoscoleces, but it has also been described in both hydatid cyst fluid and secretions of protoscoleces. In spite of a considerable amount of structural and biophysical information on the FABPs in general, their specific functions remain mysterious. Methodology/Principal Findings: We have investigated the way in which EgFABP1 may interact with membranes using a variety of fluorescence-based techniques and artificial small unilamellar vesicles. We first found that bacterial recombinant EgFABP1 is loaded with fatty acids from the synthesising bacteria, and that fatty acid binding increases its resistance to proteinases, possibly due to subtle conformational changes induced on EgFABP1. By manipulating the composition of lipid vesicles and the ionic environment, we found that EgFABP1 interacts with membranes in a direct contact, collisional, manner to exchange ligand, involving both ionic and hydrophobic interactions. Moreover, we observed that the protein can compete with cytochrome c for association with the surface of small unilamellar vesicles (SUVs). Conclusions/Significance: This work constitutes a first approach to the understanding of protein-membrane interactions of EgFABP1. The results suggest that this protein may be actively involved in the exchange and transport of fatty acids between different membranes and cellular compartments within the parasite. Citation: Porfido JL, Alvite G, Silva V, Kennedy MW, Esteves A, et al. (2012) Direct Interaction between EgFABP1, a Fatty Acid Binding Protein from Echinococcus granulosus, and Phospholipid Membranes. PLoS Negl Trop Dis 6(11): e1893. doi:10.1371/journal.pntd.0001893 Editor: Alejandro Buschiazzo, Institut Pasteur de Montevideo, Uruguay Received June 5, 2012; Accepted September 21, 2012; Published November 15, 2012 Copyright: ß 2012 Porfido et al. This is an open-access article distributed under the terms of the Creative Commons Attribution License, which permits unrestricted use, distribution, and reproduction in any medium, provided the original author and source are credited. Funding: This study was supported by grant number 083625 from Wellcome Trust ( to BC and MWK and FCE2007-57 from ANII ( to GA. The funders had no role in study design, data collection and analysis, decision to publish, or preparation of the manuscript. Competing Interests: The authors have declared that no competing interests exist. * E-mail: . These authors contributed equally to this work. lungs. The cyst produces thousand of protoscoleces, each of which can progress to the adult form when ingested by the definitive host [4], but it is the hydatid cysts in intermediate hosts that cause significant pathology and death. Hydatid disease in humans is highly pathogenic and is particularly difficult to treat successfully, especially so when cysts develop and proliferate in the lungs. Fatty acid binding proteins (FABPs) are small proteins (14– 15 kDa) that bind non-covalently to hydrophobic ligands, mainly fatty acids (FA) and retinoids. FABPs are confined to the interior of the synthesising cells, the only known exceptions to this being in nematodes [5,6]. Several tissue-specific FABP types have been identified in vertebrates, each named after the tissue in which they are predominantly expressed, and have also been given numeric designations [7]. In mammals they are implicated in intracellular Introduction Hydatidosis is a highly pathogenic infection with an almost global incidence caused by the larval stage (metacestode) of the cestode Echinococcus granulosus. In endemic areas it has serious health effects on humans, livestock and wildlife, representing a major public health and economic burden in many countries [1– 3]. Echinococcus species, as do other tapeworms of mammals, require two hosts to complete their life cycle. The E. granulosus eggs containing the infective oncosphere are shed in the faeces of wild and domestic carnivores that are the definitive hosts harbouring the dwarf adult tapeworms. Once a suitable intermediate host ingests the eggs, they hatch and the oncosphere is released, escaping from the intestine to establish hydatid cysts in liver and PLOS Neglected Tropical Diseases | 1 November 2012 | Volume 6 | Issue 11 | e1893 Direct Interaction between EgFABP1 and Membranes structure reveals the 10-stranded b-barrel fold typical of the family of intracellular lipid-binding proteins [27]. The objective of this study was to investigate the lipid transport properties and protein-membrane interaction characteristics of EgFABP1. We characterise the biophysical properties of the protein in a number of ways, and show that the protein exchanges FAs through a collisional, direct contact, mechanism with acceptor membranes, indicating that it may indeed be involved in FA dynamics within the parasite, but that it may also engage in direct, non-specific interactions with host cell membranes. Author Summary Echinococcus granulosus is the causative agent of hydatidosis, a zoonotic infection that affects humans and livestock, representing a public health and economic burden in many countries. Since the parasites are unable to synthesise most of their lipids de novo, they must acquire them from the host and then deliver them by carrier proteins to specific destinations. E. granulosus produces in abundance proteins of the fatty acid binding protein (FABP) family, one of which, EgFABP1 has been characterised at the structural and ligand binding levels, but it has not been studied in terms of the mechanism of its interaction with membranes. We have investigated the lipid transport properties and protein-membrane interaction characteristics of EgFABP1 by applying biophysical techniques. We found that EgFABP1 interacts with membranes by a mechanism which involves direct contact with them to exchange their cargo. Given that the protein has been found in the secretions of the parasite, the implications of its direct interactions with host membranes should be considered. Materials and Methods Production of recombinant EgFABP1 The cDNA encoding EgFABP1 (UniProtKB/Swiss-Prot Q02970) was subcloned into pET11b. The expression of the protein was carried out in E. coli BL21(DE3) by induction with 0.4 mM isopropyl-beta-D-thiogalactoside for 3 hours at 37uC in Luria Bertani medium in presence of 100 mg/mL of ampicillin. Cells were lysed by sonication and the lysate clarified by ultracentrifugation (25 min, 617006 g, 4uC). Following clarification, the supernatant was subjected to salting out incubating the protein for 2 hours at 4uC with 0.5 volume of a saturated ammonium sulphate solution. After centrifugation, the obtained protein solution was applied into a size exclusion chromatographic column (Sephadex G-50, Pharmacia Biotech Inc.). The fractions containing EgFABP1 were subsequently subjected to ionic exchange chromatography employing a MonoQ column (Pharmacia Biotech Inc.) in order to remove nucleic acids contamination. Delipidation was carried out using a Lipidex 1000 column (Sigma) at 37uC in a high ionic strength buffer (10 mM phosphate (K2HPO4 6 mM+KH2PO4 4 mM), 1 M KCl). uptake, storage and transport of FAs in lipid metabolism and membrane building, as well as protection from the membranedisruptive effects of free long chain FAs [8]. In addition, the nonFA-binding retinoid-binding isoforms contribute to regulation of gene expression [9]. However, the precise function of each FABP type remains poorly understood, but sub-specialization of functions is suggested by the tissue-specific and temporal expression, in addition to ligand preferences [10]. Despite very similar tertiary structures, FABPs have been found to interact with membranes in different ways that might reflect how they acquire and deliver their cargoes. The fluorescence-based biophysical approaches used for this have shown that most FABPs from mammals (adipocyte FABP, intestinal FABP, heart FABP, keratinocyte FABP, myelin FABP, etc.) and one from Schistosomes (Sj-FABPc) exhibit a collisional mechanism of ligand exchange, meaning that they interact by direct contact with a membrane in ligand transfer. In contrast, only liver FABP and cellular retinol binding protein II from mammals transfer ligands in a diffusional mechanism, meaning that transfer occurs without requiring direct contact between protein and membrane but through release of ligand into the aqueous phase followed by its intercalation into the membrane. Proteins like liver FABP may therefore be more involved in lipid storage and regulation in the cytoplasm rather than in direct transport of FAs [8,11,12]. FABPs of parasitic platyhelminths are interesting because these parasites are unable to synthesise most of their own lipids de novo, in particular long-chain FAs and cholesterol [13,14]. Such lipids must therefore be acquired from the host, and then delivered by carrier proteins to specific destinations within the parasite. Whether they are involved extracellularly in lipid acquisition from, or delivery to, host cells, remains to be seen. It is noteworthy that EgFABP1 has been found in hydatid cyst fluid and in protoscolex secretions [15,16]. A final reason for interest in FABPs is their potential role in drug delivery and the fact that they have been assayed as vaccine candidates [17–23]. EgFABP1 is considered to be a member of the heart FABP subfamily [24,25], whose members are believed to be involved in lipid oxidation processes [8]. The ligand-binding properties of EgFABP1 have been investigated by the displacement of cisparinaric acid by a set of hydrophobic ligands [26], and its crystal PLOS Neglected Tropical Diseases | Analysis of EgFABP1-bound fatty acids As an approach for studying binding preferences of EgFABP1, the lipid moiety of recombinant non-delipidated EgFABP1 was extracted according to Bligh & Dyer’s method [28] and analysed on a TLC plate using a mobile phase for resolving neutral lipids (hexane:diethyl-ether:acetic acid at 80:20:1, v:v:v). The FA composition of EgFABP1 lipid fraction was analysed by GC of their methyl esters derivatives methylated with BF3-Methanol according to the method described by Morrison & Smith [29], employing an HP 6890 device Hewlett Packard) as described previously by Maté et al. [30]. Limited proteolysis In order to analyse possible conformational changes between apo- and holo- forms, EgFABP1 was subjected to limited proteolysis experiments. The protocol was a modification of that described by Arighi et al. [31]. Briefly, clostripain (ArgC, Sigma) was activated by preincubation in 10 mM phosphate (K2HPO4 6 mM+KH2PO4 4 mM), 150 mM KCl, pH 7.4 and 1 mM DTT for 2 hours. Prior to digestion, delipidated EgFABP1 (0,5 mg/ml) was incubated for 30 min with either myristic acid, palmitic acid, stearic acid or oleic acid in ethanol (4:1 mol:mol ligand:protein) to obtain holo-forms. As a control of the FA solvent used, an equal volume of ethanol was added to the apo-form. Additional 15 min incubation with 1 mM DTT was carried out previous to the addition of the protease. At fixed intervals, samples were collected and frozen for subsequent analysis by SDS-PAGE. SDS-PAGE was carried out according to Schägger and von Jagow [32] in 16.5% acrylamide Tris-Tricine. After Coomassie Blue staining digital images were collected employing an ImageQuant 350 device (GE Healthcare). 2 November 2012 | Volume 6 | Issue 11 | e1893 Direct Interaction between EgFABP1 and Membranes In vitro binding properties of EgFABP1 membranes as described in detail elsewhere [11,33,38]. Briefly, EgFABP1 with bound 12AS was mixed at 25uC with SUVs, prepared as above, using a stopped-flow RX2000 module (Applied Photophysics Ltd.) attached to the spectrofluorometer. The NBD moiety is an energy transfer acceptor of the anthroyloxy group donor; therefore, the fluorescence of the AOFA is quenched when the ligand is bound to SUVs that contain NBD-PC. Upon mixing, transfer of AOFA from protein to membrane is directly monitored by the time-dependent decrease in anthroyloxy group fluorescence. Different SUVs and buffer compositions were employed in order to analyse the ligand transfer mechanism. Transfer assay conditions were 15:1 mol:mol EgFABP1:AOFA ratio. SUVs were added ranging from 1:10 mol:mol to 1:40 mol:mol EgFABP1:SUVs. Controls to ensure that photobleaching was eliminated were performed prior to each experiment, as previously described [38]. Data were analysed employing SigmaPlot and all curves were well described by an exponential decay function. For each experimental condition within a single experiment, at least five replicates were done. Fatty acid binding to EgFABP1 was assessed employing a fluorescent titration assay [33]. Briefly, 0,5 mM anthroyloxy-fatty acid (AOFA, Molecular Probes) was incubated at 25uC for 3 min in 40 mM Tris, 100 mM NaCl, pH 7.4 buffer (TBS) with increasing concentrations of EgFABP1. The AOFAs employed for binding assays were 12-(9-anthroyloxy)stearic acid (12AS) and 16-(9-anthroyloxy)palmitic acid (16AP). Fluorescence emission at 440 nm was registered after excitation at 383 nm in a Fluorolog-3 Spectrofluorometer (Horiba-Jobin Yvon). An exact equilibrium nsites binding model was fitted to fluorescence data (using Microcal ORIGIN software) as previously described [34]. Vesicle preparation For AOFA transfer experiments, small unilamellar vesicles (SUVs) were prepared by sonication and ultracentrifugation as described previously [35]. The standard vesicles were prepared to contain 90 mol % of egg phosphatidylcholine (EPC) and 10 mol % of N-(7nitro-2,1,3-benzoxadiazol-4-yl)-phosphatidylcholine (NBD-PC), which served as the fluorescent quencher. To increase the negative charge density of the acceptor vesicles, either 25 mol % of phosphatidylserine (PS) or cardiolipin (CL) was incorporated into the SUVs in place of an equimolar amount of EPC. Vesicles were prepared in TBS except for SUVs containing CL which were prepared in TBS with 1 mM EDTA. SUVs containing 64 mol % EPC, 10 mol % egg phosphatidylethanolamine (EPE), 25 mol % CL and 1 mol % dansyl-phosphatidylethanolamine (DPE) were prepared in 20 mM Tris, 0.1 mM EDTA, pH 7.4 for protein-membrane interaction assays. Large unilamellar vesicles (LUVs) of EPC were prepared (1 mM in phospholipids) by extrusion through polycarbonate membranes of 100 nm pore diameter (Avestin Inc., Ottawa, Canada) as described previously [35]. All lipids were purchased from Avanti Polar Lipids. EgFABP1 interaction with membranes To analyse the putative association of EgFABP1 with vesicles, an assay that exploits the well known membrane-interactive properties of cytochrome c was employed. The binding of cytochrome c to acidic membranes can be monitored by using a resonance energy transfer assay [39] in which the dansyl fluorescence of DPE-labelled SUV is quenched upon binding of cytochrome c, which contains the heme moiety quencher. Competition of EgFABP1 with cytochrome c for binding to SUVs was determined by the relief of cytochrome c-related quenching of the dansyl fluorescence. In a final volume of 200 ml, 0–48 mM EgFABP1 was added to 15 mM SUV in 20 mM Tris.HCl/ 0.1 mM EDTA, pH 7.4. After a 2 min equilibration, fluorescence emission at 520 nm was measured (lex = 335 nm). Cytochrome c (Sigma) was then added (1 mM final concentration), and the mixture equilibrated an additional 2 min period before monitoring again fluorescence emission at 520 nm. In the absence of bound FABP, the dose-dependent quenching of dansyl fluorescence is observed. An inhibition of cytochrome c-dependent quenching is interpreted as evidence for EgFABP1 interaction with SUVs, i.e., EgFABP1 prevention of subsequent cytochrome c interaction with the bilayer. Relative partition coefficient (KP) determination Ligand partition between the protein and NBD-containing SUVs was determined by measuring AOFA fluorescence at different protein:SUVs ratios obtained by adding SUV to a solution containing 10 mM EgFABP1 and 1 mM 12AS in buffer TBS at 25uC [36]. The relative partition coefficient (KP) was defined as: KP ~ ½Ligand{FABP ½SUV  | ½FABP ½Ligand{SUV  ð1Þ Results Where [Ligand-SUV] and [Ligand-FABP] are the concentration of AOFA bound to membrane and EgFABP1, respectively, and [FABP] and [SUV] are the concentration of protein and vesicles. The decrease in AOFA fluorescence as a function of SUV is related to KP by Frel ~ a|KP ½SUV  {b| ½SUV  ½FABP KP z ½FABP Lipid binding by EgFABP1 in a cellular environment This assay was performed in order com a ocorrência de raiva e leishmaniose visceral canina. Material e métodos Foram utilizados os resultados do censo canino e felino realizado em 1994 8 e os dados da coleta censitária de sangue para diagnóstico da leishmaniose visceral canina realizada na área urbana do município, entre janeiro e dezembro de 1999 (Centro de Controle de Zoonoses, Secretaria de Saúde e Higiene Pública. Boletins mensais das atividades de controle da leishmaniose visceral. Araçatuba, 1999-2004). Os dados de 2004 também foram obtidos por meio de censo canino realizado pelo Centro de Controle de Zoonoses (CCZ) da Secretaria de Saúde e Higiene Pública do município, no período de novembro de 2003 a março de 2004. Utilizou-se a divisão do município em oito áreas e 36 setores, divisão esta adotada pela Superintendência de Controle de Endemias (SUCEN) desde 1996, como padrão para as ações de saúde 9. Os dados de eutanásia canina foram obtidos dos boletins mensais das atividades de controle da raiva do Município de Araçatuba (Direção Regional de Saúde de Araçatuba, Secretaria de Estado da Saúde de São Paulo. Boletins das atividades de controle da raiva, Município de Araçatuba, 1993 a 2004). Para a comparação entre as faixas etárias da população canina consideraram-se os anos de 1994 e 2004, adotando-se o critério previamente utilizado em 1994 (< 1 ano; de 1 a 4 anos; > 4 anos). Como na coleta censitária de sangue de 1999 não houve registro da idade dos animais, a mesma não foi considerada para análise. Para a análise estatística utilizaram-se os testes do qui-quadrado e de duas proporções, adotando-se o nível de significância de 5% 10. Resultados e discussão A relação cão/habitante na área urbana de Araçatuba variou de 1,69 em 1994 para 2,03 cães em 1999, atingindo 1,79 cães para cada dez habitantes em 2004 (Tabela 1). O aumento observado no período pós-epidemia da raiva (1996 a 1998) reforça as observações de Beran & Frith 1 e Wandeler et al. 3 de que qualquer redução no tamanho da população canina por aumento na mortalidade é rapidamente compensada pelo aumento na reprodução e na taxa de sobrevivência. Quanto à distribuição sexual, houve diferença estatisticamente significante entre os períodos (p < 0,0001) com 56,2% de machos e 43,8% de fêmeas em 1994, passando a 51% e 49%, respectivamente, em 1999 e 49,9% e 50,1% em 2004. Embora na maioria dos estudos observese a predominância de animais do sexo masculino 2, em Araçatuba a predominância de machos observada em 1994 evoluiu para uma similaridade na distribuição entre os sexos, em 2004. As preferências da população que resultam na seleção de cães machos ou fêmeas são variáveis e sofrem influência de vários fatores econômicos e culturais, podendo ter influenciado os resultados observados na presente pesquisa. Observou-se também diferença estatisticamente significante (p < 0,0001) entre os anos de 1994 e 2004 para a distribuição da população canina segundo a faixa etária (Figura 1). A população de cães com até um ano de idade que representava 20,2% dos animais de 1994, passou a 32,5% em 2004 e a população de um a quatro anos de idade que era de 56,6% da população canina de 1994, diminuiu para 39,1% em 2004. Esse tipo de distribuição é típico de países do terceiro mundo e situações semelhantes foram observadas na Nigéria 11 e em Ibiúna, Estado de São Paulo 12. As implicações epidemiológicas dessa predominância de cães jovens incluem maior suscetibilidade a diferentes doenças e Tabela 1 Populações canina e humana na área urbana de Araçatuba, São Paulo, Brasil, e relação entre elas no período de 1994 a 2004. Ano Cães Habitantes Relação habitante/ cão Relação cão/ 10 habitantes * 1994 1999 2004 26.926 34.332 31.793 159.700 169.303 177.823 * Relação seguida de letras diferentes diferem entre si (p < 0,0001). 5,93 4,93 5,59 1,69 c 2,03 a 1,79 b Cad. Saúde Pública, Rio de Janeiro, 24(4):927-932, abr, 2008 ESTUDO DESCRITIVO DE UMA ESTRUTURA POPULACIONAL CANINA 929 Figura 1 Porcentagem de cães segundo a faixa etária na área urbana de Araçatuba, São Paulo, Brasil, nos anos de 1994 e 2004. baixa resposta imunológica frente a diversas vacinas contra importantes enfermidades, como a raiva 2,13. O número de eutanásias realizadas pelo CCZ declinou no período pós-raiva (1997 e 1998) e aumentou a partir de 1999 com a introdução da leishmaniose visceral (Figura 2). A taxa de eutanásia em 1994 foi de 8,8% (2.376/26.926); em 1999 foi de 14,9% (5.121/34.332) e em 2004 de 29,4% (9.364/31.793), diferenças estas estatisticamente significantes (p < 0,0001). Considerando-se o período de 11 anos, 49.380 cães foram submetidos à eutanásia no CCZ, sendo que deste total, 41.774 corresponderam ao período entre 1999 e 2004 (dados não apresentados). Ao contrário da raiva, cujas medidas de controle são amplamente eficazes, a enzootia de leishmaniose visceral no município não conta com meios de prevenção tão eficientes 14,15 e a alta taxa de eutanásia observada pode ter sido fator determinante para o decréscimo da população canina. Segundo Lima Júnior 2, elevadas taxas de mortalidade favorecem a renovação populacional o que pode resultar em população mais jovem e com maior tendência à prolificidade. Em Araçatuba, porém, a eliminação anual de um grande número de cães pode ter prejudicado seriamente o crescimento desta população uma vez que, mesmo havendo a reposição dos cães, muitos podem ter sido eliminados antes de atingirem a idade reprodutiva. A distribuição dos animais pela área urbana de Araçatuba revelou uma densidade de cães variável entre os diversos setores. Em 2004, por exemplo, os cães jovens com menos de dois anos de idade representaram 49,6% dos cães da área urbana (Figura 3). Os setores mais periféricos, com população de poder aquisitivo mais baixo, com mais problemas sociais e de saneamento ambiental, além de animais sem acompanhamento médico-veterinário, apresentaram alto percentual de cães menores de dois anos de idade (62% a 68%). Por outro lado, em setores economicamente mais desenvolvidos (região central), a porcentagem de cães com menos de dois anos de idade variou de 32,7% a 37,7%, sugerindo que a expectativa de vida dos cães destes setores é superior à dos periféricos. Os setores com maior porcentagem de animais jovens também apresentaram maior número de casos humanos de leishmaniose visceral e prevalência canina da doença (Centro de Controle de Zoonoses, Secretaria de Saúde e Higiene Pública. Boletins mensais das atividades de controle da leishmaniose visceral. Araçatuba, 1999-2004). Tal resultado é influenciado pela maior freqüência de ações de controle desenvolvidas nesses locais em decorrência dos casos humanos, resultando em maior taxa de eutanásia. Porém, o aumento da população canina mais jovem pode resultar em aumento da susceptibilidade destes cães à leishmaniose visceral, mantendo a doença na área. Cad. Saúde Pública, Rio de Janeiro, 24(4):927-932, abr, 2008 930 Andrade AM et al. Figura 2 Número de cães eutanasiados e existentes no período de 1994 a 2004 na área urbana de Araçatuba, São Paulo, Brasil. Figura 3 Porcentagem de animais de até dois anos de idade nos diferentes setores do Município de Araçatuba, São Paulo, Brasil, em 2004. São Paulo Cad. Saúde Pública, Rio de Janeiro, 24(4):927-932, abr, 2008 33% a 38% 38% a 46% 46% a 54% 54% a 62% 62% a 68% ESTUDO DESCRITIVO DE UMA ESTRUTURA POPULACIONAL CANINA 931 Conclui-se que a ocorrência de raiva e leishmaniose visceral influenciou na estrutura e composição da população canina da área urbana de Araçatuba, em decorrência das ações de controle aplicadas ao reservatório canino. Resumo Colaboradores No período de 1994 a 2004, a população canina de Araçatuba, São Paulo, Brasil, registrou duas importantes zoonoses: a raiva e a leishmaniose visceral. Analisaram-se as mudanças ocorridas nessa população durante esse período, utilizando resultados de censos caninos e de coletas censitárias de sangue realizados em 1994, 1999 e 2004. A relação cão/10 habitantes variou significativamente, passando de 1,7 em 1994 para 2,0 em 1999 e para 1,8 em 2004. A porcentagem de cães com até um ano de idade passou de 20% para 32,5% e o número de eutanásias realizadas também aumentou após 1999, com a introdução da leishmaniose visceral. O número de cães e a estrutura etária variaram nos diversos setores do município e aqueles com maior porcentagem de animais com até dois anos de idade apresentaram maior ocorrência de casos de leishmaniose visceral humana e canina. Tais resultados decorrem de ações de controle adotadas nos setores com casos humanos de leishmaniose visceral, porém, o aumento da população canina mais jovem pode resultar em aumento da susceptibilidade destes cães à doença, favorecendo a manutenção da mesma na área. A. M. Andrade contribuiu na coleta de dados, análise e interpretação dos resultados e elaboração do manuscrito. S. H. V. Perri colaborou na análise maior foco. No Brasil e no mundo os dados epidemiológicos demonstram que a epidemia avançou acometendo grupos sociais mais vulneráveis, estando os idosos entre estes 1,2. A expansão da AIDS, apesar das campanhas preventivas, é apontada em pesquisas como consequência de mudanças comportamentais impulsionadas pelo fenômeno da globalização, da massificação da notícia e da relativização de valores 5,6. É dito, ainda, que o aumento da infecção em idosos se deve a não assimilação/ adoção por parte desta população das medidas para o sexo seguro. Atualmente, medicamentos Cad. Saúde Pública, Rio de Janeiro, 29(10):2131-2135, out, 2013 CARACTERIZAÇÃO EPIDEMIOLÓGICA DOS CASOS DE AIDS 2133 Tabela 1 Distribuição dos casos de AIDS em pessoas com 60 anos ou mais, segundo as Gerências Regionais de Saúde (GERES) de Pernambuco, Brasil, 1998 a 2008. GERES 1998 1999 2000 2001 2002 2003 2004 2005 2006 2007 2008 Total % I 12 11 9 15 21 15 20 27 18 15 20 183 62,5 II 0 0 0 0 0 1 0 0 1 0 0 2 0,7 III 0 1 1 0 0 0 0 0 1 0 0 3 1,0 IV 0 1 1 0 3 1 0 3 2 4 2 17 5,8 V 0 0 0 1 1 0 0 0 1 0 0 3 1,0 VI 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 1 0,3 VII 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 1 0,3 VIII 0 1 0 0 0 0 0 0 1 0 1 3 1,0 IX 0 0 0 0 1 0 0 0 1 0 0 2 0,7 X 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0,3 XI 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0,0 Pernambuco 12 14 12 16 26 17 20 32 25 19 23 216 73,7 Ignorado 0 0 9 8 10 7 7 2 15 19 0 77 26,3 Total 12 14 21 24 36 24 27 34 40 38 23 293 100,0 Fonte: Sistema de Informação de Agravos de Notificação (SINAN), 2010. Figura 1 Incidência dos casos de AIDS por 100 mil habitantes em pessoas com 60 anos ou mais, segundo ano de diagnóstico. Pernambuco, Brasil, 1998 a 2008. Fonte: Sistema de Informação de Agravos de Notificação (SINAN), 2010. que inibem a impotência sexual e a reposição hormonal fazem com que os idosos passem a ter uma vida sexual mais ativa, não utilizando, contudo, medidas preventivas por não se sentirem vulneráveis 6. Pesquisas brasileiras constatam o aumento de casos de AIDS em pessoas com menor escolaridade 7,8,9,10,11, ficando esta condição demonstrada neste estudo. A via heterossexual foi a categoria de maior expressão, reforçando que a prática sexual, sem proteção, constitui a mais importante via de transmissão também entre os idosos, denotando a necessidade de abordagens para o sexo seguro também para esta faixa etária. Chama a atenção o fato de não ter havido nenhum caso de UDI entre os idosos deste trabalho. Possivelmente, assumindo erroneamente que es- Cad. Saúde Pública, Rio de Janeiro, 29(10):2131-2135, out, 2013 2134 Silva MM et al. Tabela 2 Distribuição dos casos de AIDS em pessoas com 60 anos ou mais, segundo sexo, anos de estudos e categoria de exposição. Pernambuco, Brasil, 1998 a 2008. Variáveis 60-69 n% Faixa etária (anos) 70-79 80 e mais n%n% Sexo Masculino 159 54,2 33 11,3 Feminino 74 25,3 18 6,2 Anos de estudos Nenhum 19 6,4 3 1,0 1-3 38 13,0 6 2,1 4-7 28 9,5 7 2,4 8-11 21 7,1 2 0,7 12 e mais 20 6,8 3 1,0 Ignorado 107 36,5 30 10,2 Categoria de exposição Homossexual 15 5,1 3 1,0 Bissexual 10 3,4 2 0,7 Heterossexual 108 36,9 19 6,5 UDI 0 0,0 0 0,0 Ignorado 100 34,2 27 9,2 Total 233 79,5 51 17,4 UDI: usuários de drogas injetáveis. Fonte: Sistema de Informação de Agravos de Notificação (SINAN), 2010 3 6 1 1 2 0 1 4 2 0 4 0 3 9 1,0 2,0 0,3 0,3 0,7 0,0 0,3 1,4 0,7 0,0 1,4 0,0 1,0 3,1 Total n% 195 66,5 98 33,5 23 7,8 45 15,4 37 12,6 23 7,8 24 8,2 141 48,1 20 6,8 12 4,1 131 44,7 0 0,0 130 44,4 293 100,0 se grupo não é passível de tal comportamento, os profissionais de saúde não tenham investigado essa prática (no presente ou no passado) nessa população, embora seja essa abordagem um fator importante na investigação epidemiológica do caso 10,11. A ausência de casos em alguns anos deste estudo pode refletir a falta de diagnóstico, a subnotificação, atraso na investigação, denotando, todavia, baixa qualidade da informação coletada, sendo este um dos principais problemas da vigilância epidemiológica 12. Considerações finais O envelhecimento para ser experiência positiva exige independência e qualidade de vida, concebendo o exercício da sexualidade como natural e, portanto, inerente a essa população. A incidência de AIDS na população estudada faz supor que as campanhas de prevenção sobre HIV/AIDS e outras DST, até então realizadas, não estão atingindo eficazmente essa população. Faz-se necessário que campanhas específicas sejam pensadas e que os serviços de saúde abordem essa temática durante as consultas de rotina em atendimento aos idosos, possibilitando a prevenção primária. Para isso, é preciso capacitar profissionais, não só os envolvidos com a vigilância epidemiológica, mas, especificamente, os que assistem aos pacientes, para que atentem sobre a importância da informação. A confiabilidade, completude e atualização dos dados de notificação melhoram a qualidade e privilegiarão as tomadas de decisões. Cad. Saúde Pública, Rio de Janeiro, 29(10):2131-2135, out, 2013 CARACTERIZAÇÃO EPIDEMIOLÓGICA DOS CASOS DE AIDS 2135 Resumen Colaboradores Se están produciendo cambios en el escenario mundial durante los últimos años, debido a la reducción de las tasas de fecundidad y mortalidad, y como resultado, la longevidad se presenta como un fenómeno real. Durante la madurez, la sexualidad viene asociada a prejuicios más diversos. Este estudio caracteriza los casos de SIDA en personas de 60 años o más que vivían en el estado de Pernambuco, Brasil, y que se notificaron al Departamento de Salud de Pernambuco entre el 1 enero 1998 al 31 diciembre 2008. Se realizó un estudio transversal/ datos descriptivos con información del Sistema de Notificación de Resultados. En 1998, la tasa de incidencia del SIDA en la población estudiada fue de 1,6 casos por cada 100 mil habitantes, elevándose a 4,8 casos/100 mil habitantes en 2008, con un incremento del 200%. Es evidente la necesidad de desarrollo de la prevención, el diagnóstico y la asistencia dirigida específicamente a las personas mayores, ya que la sexualidad esa etapa de la vida, sigue rodeada de muchos tabúes y mitos. M. M. Silva, A. L. R. Vasconcelos e L. K. N. P. Ribeiro contribuíram na concepção do desenho, análise e interpretação dos dados, redação do artigo, e elaboraram e fizeram todas as correções necessárias até a aprovação da versão final. Agradecimentos Agradecemos ao Departamento de Saúde Coletiva, Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães, Fundação Oswaldo Cruz e ao Núcleo de Epidemiologia da Secretaria Estadual de Saúde de Pernambuco, pelo incentivo à pesquisa e ao fornecimento de dados. VIH; Síndrome de Inmunodeficiencia Adquirida; Envejecimiento de la Población Referências 1. Brito A, Castilho E, Szwarcwald C. AIDS e infecção pelo HIV no Brasil: uma epidemia multifacetada. Rev Soc Bras Med Trop 2001; 34:207-17. 2. Ministério da Saúde. Curso básico de vigilância epidemiológica. Brasília: Ministério da Saúde; 2005. 3. Barbosa LM. A dinâmica da epidemia de AIDS nas regiões nordeste e sudeste [Tese de Doutorado]. Belo Horizonte: Universidade Federal de Minas Gerais; 2001. 4. Rede Interagencial de Informação para a Saúde. Indicadores básicos para a saúde no Brasil: conceitos e aplicações. 2a Ed. Brasília: Organização PanAmericana da Saúde; 2008. 5. Grangeiro A, Escuder M, Castilho E. Magnitude e tendência da epidemia de AIDS em municípios brasileiros de 2002-2006. Rev Saúde Pública 2010; 44:430-40. 6. Rodrigues LCB. As vivências da sexualidade de idosos [Dissertação de Mestrado]. Rio Grande: Universidade Federal do Rio Grande; 2008. 7. Rique J, Pinto KM. Perfil epidemiológico dos pacientes HIV/AIDS que abandonaram a terapia retroviral [Monografia de Graduação]. Recife: Faculdade de Enfermagem Nossa Senhora das Graças, Universidade de Pernambuco; 2001. 8. Rodrigues Jr. A, Castilho E. A epidemia de AIDS no Brasil, 1991-2000: descrição espaço-temporal. Rev Soc Bras Med Trop 2004; 37:312-7. 9. Pottes F, Brito A, Gouveia G, Araújo C, Carneiro R. AIDS e envelhecimento: características dos casos com idade igual ou maior que 50 anos em Pernambuco, de 1990 a 2000. Rev Bras Epidemiol 2007; 10:338-51. 10. Toledo L, Maciel E, Rodrigues L, Tristão-Sá R, Fregona G. Características e tendência da AIDS entre idosos no Estado do Espírito Santo. Rev Soc Bras Med Trop 2010; 43:264-7. 11. Perez B, Gasparini S. A vivência do idoso no processo de envelhecer e o HIV/AIDS: uma reconstrução dupla com suas possibilidades e limites. J Bras AIDS 2005; 6:106-9. 12. Gonçalves V, Kerr L, Mota R, Mota J. A Estimativa de subnotificação de casos de AIDS em uma capital do Nordeste. Rev Bras Epidemiol 2008; 11:356-64. Recebido em 06/Nov/2012 Versão final reapresentada em 10/Mai/2013 Aprovado em 05/Jun/2013 Cad. Saúde Pública, Rio de Janeiro, 29(10):2131-2135, out, 2013
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Ingressou : 2016-12-29

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