Evaluation healing of jejunal anastomosis in preoperative dexamethasone treated dogs

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Iraqi Journal of Veterinary Sciences, Vol. 29, No. 1-2, 2015(7-12)     Evaluation healing of jejunal anastomosis in preoperative dexamethasone treated dogs A.S. Al-Qadhi1, A.M. Al-Hasan1 and M.D. Kako2 1 Department of Surgery and Theriogenology, 2Department of Pathology and Poultry Diseases, College of Veterinary Medicine, University of Mosul, Mosul, Iraq (Received March 11, 2014; Accepted June 4, 2014) Abstract The objective of this study is to evaluate the healing process of jejunal anastomosis by the aid of histopathology and measurement of bursting pressure of anastomosis site in thirty two adult preoperatively with dexamethasone. The animals were randomly divided into 2 equal groups: Group 1: consists of 16 dogs underwent apposition end-to-end jejunal anastomosis using simple interrupted suture technique which in turn divided into 2 subgroups: subgroup A: consists of 8 dogs treated preoperatively for 15 days with dexamethasone at a dose of (0.2mg/kg) given I/M. Subgroup B: control group consists of 8 dogs not treated with dexamethasone. Group 2: consists of 16 dogs underwent inverted end-to-end jejunal anastomosis using continuous Lembert suture pattern that also divided into 2 subgroups: subgroup A: consists of 8 dogs treated preoperatively for 15 days with dexamethasone at a dose of (0.2mg/kg) given I/M. subgroup B: control group consists of 8 dogs not treated with dexamethasone. The result of bursting pressure measurement showed higher tensile strength in the control groups (445±9.6) in comparison with the steroidal groups (255±25.3) for both techniques. The histopathological study showed that the healing was good in all groups but the rupture that occur due to shedding the pressure lead to non discrimination between which is better in terms of healing. Massonʼs trichrome showed that collagen content of subgroups taking dexamethasone was lower than that of subgroups not treated with dexamethasone. Keywords: Jejunal, Dexamethasone, Anastomosis, Bursting pressure, Healing, Dogs, Preoperativ, Treated Available online at ‫ل ع م ة ب لدكس ميث و قبل لج حة‬ ‫وو ق قو‬ ‫ لع‬،‫ ل صل‬،‫ ج مع ل صل‬، ‫تف م لص ئم في لكا‬ ‫تقييم لت‬ ‫ح د سعد لق ضي و عبد لح يم مولو لحسن و مھ‬ ‫ ك ي ل ب ل ي‬،‫لدو جن‬ ‫وم‬ ‫ ف ع ام‬، ‫ف ع لج ح وع م تن سل لحي‬ ‫ل اصة‬ ‫ تت لف‬: ‫ ل ج ع اول‬:‫حي ن من ل ا ل لغ ل ح ي تم تقسي ھ عش ئي و ب لتس و ل مج عتين‬ ‫أج يت لد س ع‬ ‫يق ل ي‬ ‫يق نھ ي ل نھ ي وبتقني تق بل ل ق وب ست د‬ ‫وت م امع ء ب ست د‬ ‫ك ج يت ع يھ ع ي ست‬ ‫من‬ ‫ ض ت كا تم ع ءھ عق لدكس ميث و‬:A ‫ ل ج ع ل عي‬:‫ل سي ل تق ع وتنقسم ھ ل ج ع ل مج عتين ف عيتين‬ ‫ ض ت كا‬:B ‫ ل ج ع ل عي‬. ‫كي غ ( تع عن يق لع‬/ ‫ م غ‬, ) ‫ي ق ل لع ي لج حي وبج ع‬ ‫لد‬ ‫وت م‬ ‫ك ج يت ع يھ ع ي ست‬ ‫ تت لف من‬: ‫ ل ج ع لث ني‬.( ‫)بدو ع ء عق لدكس ميث و‬ ‫وتعت مج ع سي‬ ‫وتنقسم ھ‬ ‫ل ست‬ ‫ل‬ ‫يق ل ي‬ ‫ل ق ب ل د خل وب ست د‬ ‫يق نھ ي ل نھ ي وبتقني لح ف‬ ‫امع ء ب ست د‬ ‫ي ق ل لع ي‬ ‫ ض ت كا تم ع ءھ عق لدكس ميث و ل د‬:A ‫ ل ج ع ل عي‬:‫ل ج ع ل مج عتين ف عيتين‬ ‫ ض ت كا وتعت مج ع سي‬:B ‫ ل ج ع ل عي‬. ‫عن يق لع‬ ‫كي غ ( تع‬/ ‫ م غ‬, ) ‫لج حي وبج ع‬ ‫ق لشد في من ق لت م ك نت ع لي في مج ميع‬ ‫نت ئج قي ق ل غط ان ج‬ ‫ ھ‬.( ‫)بدو ع ء عق لدكس ميث و‬ ‫ك ق يل في كل ل ج ميع لتي‬ ‫في ل ج ميع لتي تم ع ءھ عق لدكس ميث و و معد ل غط ان ج‬ ‫بين ك نت و‬ ‫لسي‬ 7   Iraqi Journal of Veterinary Sciences, Vol. 29, No. 1-2, 2015(7-12)   ‫نت ئج لد س‬ ‫ھ‬ ‫ ك‬.( , ± ) ‫لسي‬ ‫ل عد لت ي بين يھ‬ ‫غط ل س ط ع يه وھ‬ ‫عق‬ ‫و ب كل ل ج ميع ل عي لتي خ‬ . ‫لغي مع م بعق لدكس ميث و‬ ‫ ( ول ن ك ع لي في كل مج ميع‬, ± ) ‫لدكس ميث و‬ ‫ل ح ل ك بس ب ل‬ ‫ك جيد في كل ل ج ميع ل ن لت‬ ‫ل ص مثل ل س ثاثي ل‬ ‫حظ خا ل غ ب ل غ‬ ‫معد تش يل الي ف لغ وي قل عند مق نتھ ب ل ج ميع ل عي‬   ‫تم ع ءھ عق‬ ‫لنسجي ب الت‬ ‫ وك لك ل‬.‫ف ل‬ ‫لدكس ميث و ك‬ subgroups, eight for each subgroup. Each animal underwent surgery was fastened from food for 24 hours, 12 hours from the water. Anesthesia induced intramuscularly, by a mixture of xylazine (5 mg/kg) and ketamine hydrochloride (15 mg/kg), and maintained by i.m. administration of increment doses from the same mixture when demanded. The ventral abdominal wall was prepared for aseptic surgery from xyphoid cartilage to umbilical area, a 7-10 cm midline incision was made on the skin in linea alba by scalpel then by blunt dissection with scissors the abdomen was opened. A loop of jejunum was exteriorized through a laparotomy incision with the packing of laparotomy sponges. About 5 cm jejunum loop was selected for resection. Normal saline (Nacl 0.9%) was applied continuously on jejunum out of the abdominal cavity along the time of the operation to avoid dryness, the two ends of the resected jejunum were approximated by using 3-0 polyglycolic acid suture. In group one simple interrupted suture technique (apposition technuique) begin from mesenteric border and the mesentery by simple interrupted suturing. In group two Lumbertʼs suture pattern (inverted technique) begin from mesenteric border and the mesentery by simple continuous suturing. Then the anastomosis site was checked for leakage by application of gentle pressure on the site of anastomosis, followed by a thorough cleaning of anastomosis site and jejunal loop with normal saline to remove any blood clot before returning it to the abdominal cavity. The abdominal wall incision and skin was closed routinely, and antibiotic spray was applied on the skin incision. Systemic antibiotic, pencillin-streptomycin was injected intramuscularly, daily for 3 to 5 days at a dose rate of 10,000 IU/kg body weight and 10 mg/kg body weight, respectively. Four animals from each subgroup at 7 and 15 days after operation were anesthetized. A piece of 20-25 cm of jejunum including anastomotic site was removed and kept in normal saline for further studies. The mechanical strength of the anastomosis was determined by bursting pressure, which represents the resistance of the jejunum to intraluminal pressure, by using a sphygmomanometer which was modified to be fit for this purpose. Any leakage from the anastomosis site was revealed by the presence of bubbles. The pressure value recorded as leakage pressure was that one which immediately preceded the pressure fall concomitant with the emission of bubbles or disruption of the bowel. Tissue specimens from anastomotic site were collected and fixed in 10% neutral buffered formalin for 48 hours. The specimens were dehydrated, cleared, embedded Introduction Failure of anastomotic healing was considered as a serious complication of bowel surgery, which increases morbidity and mortality rates significantly (1). The intestinal wall integrity and mechanical strength mostly collagen dependable, which is a structural protein present and concentrated mainly in the submucosal layer (2). Anastomotic healing was mainly assessed by 3parametres; physical evaluation (bursting pressure), histopathological evaluation and biochemical evaluation (tissue hydroxyproline levels) (3). Though the histopathology still the corner stone of studying the healing process, the bursting pressure is an important and dependable mechanical parameter for evaluation of intestinal anastomosis healing (4,5). Corticosteroid is antiinflammatory and immunosuppresive effects. Antiinflammatory effects are complex but primarily occur via inhibition of inflammatory cells and suppression of expression of inflammatory mediators (5). The action of corticosteroids on gastrointestinal tract involves increase in the secretion of gastric acid, pepsin and trypsin they alter the structure of the mucine and decrease mucosal cell proliferation (6). Also usage in gastrointestinal disease to tide the patient over a critical period of the disease in ulcerative colitis and enteritis (7) Mechanisms of action of corticosteroids include; inhibition of the release of arachidonic acid, decrease synthesis of cyclooxygenase-2 (COX-2), inhibition of the production of cytokines, and effect on the concentration, distribution, and function of peripheral leukocytes (8). Despite massive progress in the medical treatment of inflammatory bowel diseases (IBD), corticosteroids still represent the most effective drugs in the management of acute IBD. Unfortunately, surgical intervention under treatment with corticosteroids is often complicated by impaired intestinal wound healing. The aim of our study was to assess the effects of the corticosteroids dexamethasone on intestinal anastomosis in vivo to identify potential causes of impaired intestinal wound healing under corticosteroid. Materials and methods Thirty two adult local breed dogs, weighing 15-30 kg, from both sexes, aged from 1.5-3 years were used in this study. The dogs were divided randomly into two groups, sixteen from each group and each group divided into two 8   Iraqi Journa al of Veterinaryy Sciences, Voll. 29, No. 1-2, 22015(7-12)     iin paraffin waax, sectioned at a 5 µm thick kness and stain ned w with two stain ns hematoxylin n and eosin staain and Masson nʼs T Trichrome staains. The resullts statistically y analyzed usiing A ANOVA and Duncan D test an nd the level of significance was w aat (P<0.05). the steroid treatm ment groups inn comparison with control grouups. It has beenn observed duuring shedding the pressure on thhe intestines inn steroidal grouups for measuuring bursting presssures rupture in serous layeer but not obsserved in the contrrol groups. Thhe results show wed there was nno rupture or leakaage from the aanastomotic sitee in the inverteed group, but happpened away froom the site of anastomosis inn any area of intacct bowel in moost of the animals of this grouup, but in the appoosition group, tthe rupture andd leakage was happening in the ssite of anastom mosis in all anim mals of this grooup. R Results B Bursting presssure measurement Mean anasstomotic bursting pressures are a given in tab ble ((1). The mean bursting presssure values weere lower in alll of T Table 1: The mean m of burstin ng pressure ± sttander error (S.E.) for both grroups after 7 aand 15 days Apposition n of the layers technique by uusing IInvert techniquue by use single row of siimple interruptted sutures continuous L Lumber suture P Pattern Subgroups Controll group Steroidal grroup C Control group Steroiidal group Mean of burstting pressure 440 ± 11.6 270 ± 300 370 ± 34.2 2555 ± 25.3 C,a B,a at 7 days (mm mHg) A,a B,a Mean of burstting pressure 425 ± 22.2 257.5 ± 66.3 445 ± 9.6 2990 ± 10 B,b C,a at 15 days (mm mHg) B,,a C,a A A,B,C the diffferent letter in each e row refer to significant differences d (P< <0.05). a,b the different letterr in each colum mn refers to significant diffferences (P<0.0 05). Groups A As observed a severe ruptture in the m mucosal and subm mucosal layerss of the intestine as well ass the fibrous tissuue (Figure 2). A After staining with Massonʼʼs Trichrome spec ial stain (M.T T.CH) there w was of deposiition a large amouunt of collagenn fibers in subbmucosal and sserosal layers also in the granuulation tissue fformed in thee site of the anas tomosis withh the infilttration of mononuclear inflaammatory cellss and the presennce of newly fformed blood vesseels (Figure 3). H Histopatholog gy Histopatho ological interp pretation in the group one o ((Apposition laayers) at 15 days d after surg gery revealed rerregeneration of o epithelial cells c of the mucosa m and the t fformation of mature fibro ous tissue and d infiltration of iinflammatory mononuclear cells c in the site of anastomo osis ((Figure 1). F Figure 1: Re-regeneration of o epithelial cells with matu ure ffibrous tissue infiltration with mononucleear inflammato ory ccells and collaagen fiber in th he site of anasto omosis in anim mal ccontrol group after a 15 days. H & E stain, X43. X Figuure 2: Severe ruupture in mucoosal and submuucosal layers also in fibrous tisssue as a resuult of exposuure to severe presssure in animal of dexamethassone group afteer 15 days. H & E stain, X43. 9   Iraqi Journa al of Veterinaryy Sciences, Voll. 29, No. 1-2, 22015(7-12)     In group tw wo (inverted teechnique) therre was depositiion oof dense collaagen fibers in the submucosal layer with the t ggranulation tisssue formation n containing fibers f and new wly fformed blood d vessels preesence of po olymorphonucleear ccellsand mono onuclear inflaammatory cellss in the site of aanastomosis (Figure ( 4). Ass observed ree-regeneration of m mucosal layerrs of the intestine and depo osition of matu ure ffibrous tissu ue with in nfiltration off mononucleear iinflammatory cells in the site of anastom mosis (Figure 5). D Deposition off collagen fib bers in submu ucosal layer and a fformation of fibrous f tissue which w extended d to serosal lay yer ((Figure 6). Figuure 5: Re-regenneration of mucosal layer of intestine and depoosition of mat ature fibrous ttissue with innfiltration of monnonuclear inflam mmatory cells in animal of ccontrol group afterr 15 days. H & E stain, X43. F Figure 3: Depo osition of collaagen fibers in submucosal s lay yer aand in granulation tissue in n the site of anastomosis and a iinfiltration witth mononucleaar inflammatorry cells in anim mal oof control grou up after 7 days. M.T.CH stain n, X105. mucosal layer Figuure 6: Depositioon of collagen fibers in subm and fibrous tissuee formation w which extendeed to serosal M.T.CH stain, layerr in dexamethaasone group affter 15 days. M X1055. Disccussion Burssting pressuree measuremen nt T That of the m methods used to measure thee strength of anas tomosis site iss measuring thhe strength off the bursting presssure which is a pointer to inndicate the efficciency of the healiing process ((11,12). The results of meeasuring the burstting pressure iin the two grooups revealed a significant diffeerence betweenn animals treated with sterroid and the anim mals untreated w with steroid inn the same grouup, The mean burstting pressures values were lower in all oof the steroid F Figure 4: deposition of dense d collagen n fibers in the t submucosal layer l with granulation g tissue formatiion iinfiltrated wiith polymorp phonuclear an nd mononucleear iinflammatory cells in group p treated with h dexamethaso one aafter 7 days. H & E stain, X4 43. 10   Iraqi Journal of Veterinary Sciences, Vol. 29, No. 1-2, 2015(7-12)     treatment groups and higher in all control groups and this agree with other authors (9,13,14). Several other studies concluded that only long term steroid treatment significantly weakens colonic anastomosis when use steroid for 60 days (15-17) this disagree with our study when use steroid for 15 days this confirm presence weakens in the site of intestinal anastomosis, confirm previous results on an impaired healing of colonic anastomosis upon corticosteroids treatment (16,18). In the present study, observed the corticosteroids have negative effect on the site of anastomosis and that agree with other authors (9,19-22). One reason for this effect is due to the influence of corticosteroids on the level of hydroxyproline, which contributes to the formation of collagen fiber, where he works on the lower level of hydroxyproline and this decline leads to weakness site the anastomosis and thus has a negative effect on the bursting pressure. This agrees with other authors (23,24) When he proved that level hydroxyproline is low in the steroidal group comparison with the control group. The changes in hydroxyproline content reflect the changes in the amount of collagen (21,25). When measuring the strength of the bursting pressure did not leak or rupture in the site of anastomosis in inverted group, but the rupture was happening away from the site of the anastomosis, in the intact part of the intestines and this result confirms that the anastomosis in this technique will be a force of intact parts of the intestines this agree with (10). References 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. Histopathology examination The formation of mature fibrous tissue that infiltrated with inflammatory cells and collagen fibers in the site of anastomosis this indicates that access to the maturation phase which is a reorganization of the collagen fiber and remodel. This is consistent with researchers (4,27). The rupture made in the mucous layer returns is caused to the pressure off them when we have a measured bursting pressure, also the slides were stained with special stain was observed that the concentrate of collagen fiber in the dexamethasone group lesser than in the control group was caused returns to the influence of steroidal drugs at the level of hydroxyproline which contributes to the formation of collagen fiber this is consistent with researchers (23,24) also with other researchers (16,18) when they said the use of steroidal drugs in the case of intestinal anastomosis have adverse side effect which include weakness of the wound healing. The mechanism of these effects is to prevent the synthesis of collagen and connective tissue repair (18). The deposition of granulation tissue in all groups refers to the occurrence healing in the first intension and this agrees with finding of other researches (27). 14. 15. 16. 17. 18. 19. 20. 21. 22. 23. Hendricks T, Mastboom WJ. Healing of experimental anastomosis. Dis Colon Rectum. 1990;33:891-901. Gabella G. The cross-play arrangement of collagen fibers in the submucosa of the mammalian small intestine. Cell Tissue Res. 1987;248:491-497. Esen E, Sucullu I, Sinan H, Filiz I, Yucel E, Akin ML. The efects of non steriodal anti-inflammatory drugs on healing of colonic anastomosis in rats. East J Med. 2008;13:13-18. Eubanks TR, Greenberg JJ, Dobrin PB, Harford FJ, Gamelli RL. The effects of different corticosteroids on the healing colon anastomosis and cecum in a rat model. Am Surg.1997;63:266-269. Inan A, Surgit O, Sen M, Akpinar A, Bozer M. Etofenamate and anastomosis in rats. Turk J Med Sci. 2009;5:713-718. Plumb DC. Plumbʼs veterinary drug handbook. 6th ed, USA: Blackwell Iowa United States of America. 2008: pp354-356. Toth PP. Mosbyʼs foram contidos fisicamente em decúbito lateral direito, e as agulhas posicionadas sobre os acupontos (ACs) coração 7 (C-7 – Shenmen), localizado entre o processo estiloide lateral e o osso cárpico acessório, exatamente na dobra da articulação úmero-rádio-ulnar, e pericárdio 6 (PC-6 – Neiguan), localizado entre os tendões do músculo flexor carporradial e do músculo flexor digital superficial (Fig. 1A, 1B e 1C), conforme descrito por Draehmpaehl e Zohmann (1997). Já para a segunda seção, os animais foram novamente posicionados em decúbito lateral direito, e as agulhas inseridas em acupontos falsos (AF), localizados no oitavo e no nono espaço intercostal esquerdo (Figura 1D), onde não há interferência de nenhum outro meridiano, conforme descrito por (Draehmpaehl e Zohmann, 1994). Independentemente da seção, não foi realizada estimulação manual das agulhas, e os acupontos permaneceram estimulados por um período de 30 minutos, respeitando-se o período mínimo de 10 a 20 minutos sugerido por Scott (2001) para que o acuponto possa promover um efeito observável. Figura 1. Localização dos acupontos C-7 (seta em A) e PC-6 (seta em B) no cão (Adaptado de Draehmpaehl e Zohmann, 1997). Em C, acupuntura em cão do experimento acuponto C-7 (seta azul) e acuponto PC-6 (seta laranja). Em D, acupuntura em cão do experimento em acuponto falso. Arquivo pessoal, 2014.  Previamente à aplicação das agulhas nos ACs, foi realizado um registro eletrocardiográfico (ECG) com dois minutos de duração e, após a inserção das agulhas nos ACs, o registro eletrocardiográfico se manteve durante os 30 minutos de acupuntura. Para a realização do eletrocardiograma, foi utilizado um aparelho de eletrocardiografia computadorizada (ECGPC – TEB®), respeitando-se o padrão de fixação de eletrodos descrito por Tilley (1992), com registro das derivações bipolares e unipolares aumentadas e calibração de 25mm/s e 1mV (N). Os dados do ECG foram interpretados de forma comparativa pré e pós-estimulação dos acupontos, sendo os dados pós-estimulação coletados e interpretados em intervalos de cinco minutos até o final da gravação (30 minutos). Arq. Bras. Med. Vet. Zootec., v.68, n.1, p.252-256, 2016 253 Silva et al.  Para a análise da VFC, foi utilizada a fórmula disponível em Carareto et al. (2007). A normalidade dos dados obtidos foi verificada pelo teste de Shapiro-Wilk (P>0,05), seguida pelo teste ANOVA com pós-teste de Bonferroni para as variáveis paramétricas e pelo teste de Kruskal-Wallis com pós-teste de Dunn (P<0,05) para as variáveis não paramétricas. Foi realizada análise descritiva para as variáveis qualitativas. No presente estudo, 90% dos animais apresentaram arritmia sinusal respiratória, demonstrando maior influência do sistema nervoso simpático, em todos os momentos do grupo ACs, enquanto no grupo AF esse ritmo cardíaco esteve presente em 100% dos animais, em todos os momentos. O ritmo sinusal foi encontrado apenas em 10% dos animais do grupo ACs, sugestivamente por se tratar da primeira exposição dos animais ao experimento, resultando em maior influência parassimpática sobre o sistema cardiovascular. Conforme demonstrado na Tab. 1, houve pequena e irrelevante diferença quando comparada a FC de todos os momentos do grupo ACs com os momentos do grupo AF, o que evidencia, portanto, a ineficácia da estimulação dos acupontos sobre esse parâmetro. Tabela 1. Frequência cardíaca (FC) e variabilidade da frequência cardíaca (VFC) obtidas com a realização dos acupontos verdadeiros (AV) C-7 e PC-6 e do acuponto falso (AF) em diferentes momentos do ECG, expressos em mediana (percentil 25% - percentil 75%) para a FC e média±desvio-padrão para a VFC Momentos FC (bpm) VFC AV AF AV AF 0 minuto 107 (92-130)a 112 (93-129)a 12,79±0,46ab 12,71±0,47b 5 minutos 90 (79-121)a 93 (82-115)a 13,08± 0,48ab 13,09± 0,49ab 10 minutos 94 (79-118)a 88 (70-123)a 13,01± 0,48ab 13,12± 0,53ab 15 minutos 96 (76-120)a 99 (81-115)a 13,04± 0,52ab 13,17± 0,51a 20 minutos 95 (79-120)a 95 (81-112)a 13,13± 0,51ab 13,07± 0,54ab 25 minutos 104 (83-115)a 89 (76-108)a 13,15± 0,45ab 13,17± 0,53a 30 minutos 87 (82-107)a 95 (81-117)a 13,18± 0,46ab 13,11± 0,56ab P = 0,0890 P = 0,0051 Para a FC, valores seguidos por letras distintas diferem entre si (P<0,05) ao teste de Dunn. Para a VFC, valores seguidos por letras distintas diferem entre si (P<0,05) ao teste de Bonferroni. Não foi observada diferença na VFC (Tab. 1) entre os grupos do ACs e AF, exceto quando comparado apenas o momento basal com os momentos 15 e 25 minutos do AF, contudo sem relevância clínica para o estudo. Sabidamente, VFC constitui uma medida simples e não invasiva que avalia os efeitos do sistema nervoso autônomo sobre o coração. Variações nessa variabilidade são normais e esperadas, indicando habilidade do coração em responder a múltiplos estímulos fisiológicos e ambientais. Em síntese, uma alta VFC representa boa adaptação, caracterizando um indivíduo saudável, com mecanismos autonômicos eficientes, enquanto a baixa VFC representa adaptação anormal e insuficiente do SNA (Carareto et al., 2007). Dentre as opções terapêuticas para o tratamento de anormalidades dos mecanismos autonômicos, a acupuntura vem se destacando em vários estudos em animais, entretanto em nenhum desses estudos se objetivou a avaliação do efeito da acupuntura em indivíduos saudáveis, conforme ocorreu no presente estudo, fator limitante à discussão mais aprofundada. Observam-se, na literatura, diversos estudos em que foram observados os efeitos da acupuntura sobre pacientes com diferentes distúrbios cardiovasculares. Syuu et al. (2001) relataram efeitos benéficos da estimulação do acuponto PC-6 em cães anestesiados e sob toracotomia. Nesse estudo, os autores descrevem reduções na pressão arterial média, volume diastólico final, frequência cardíaca, débito cardíaco e pressão sistólica final mediante estimulação do acuponto. O efeito cardiovascular da acupuntura sobre o acuponto PC-6 em cães também foi observado por Jingbi (2004) em modelo de experimental de infarto agudo do miocárdio. Nesse estudo, foi observado que a acupuntura proporcionou redução do segmento ST do eletrocardiograma, além de reduzir as áreas de infarto induzidas pela ligadura coronariana. Entretanto, esses dois 254 Arq. Bras. Med. Vet. Zootec., v.68, n.1, p.252-256, 2016 Efeitos da acupuntura estudos diferem do presente pelo fato de as agulhas terem sido estimuladas eletricamente (eletroacupuntura), enquanto no presente estudo estas permaneceram em repouso. Cárdenas (2006) observou que a estimulação dos mesmos acupontos empregados no presente estudo em cavalos sob anestesia geral demonstrou efeitos positivos sobre a taquicardia ventricular induzida por infusão contínua de dopamina, nos quais a estimulação dos ACs C-7 e PC-6 promoveu diminuição do tempo da taquicardia ventricular, demonstrando, assim, a eficácia da estimulação desses acupontos em animais. Um estudo controlado em ratos demonstrou que a estimulação dos acupontos PC-5 e PC-6 reduziu significativamente a incidência de taquiarritmias induzidas experimentalmente pós-oclusão e reperfusão da artéria coronária esquerda (Lujan et al., 2007). Em humanos, a revisão de oito estudos utilizando acupuntura para o tratamento de arritmias cardíacas encontrou cerca de 87 a 100% que foram convertidos ao ritmo sinusal após a estimulação dos acupontos (Xie e Wedemeyer, 2012). estudo não se valeu da estimulação elétrica sobre os acupontos falsos ou verdadeiros (C-7 Shenmen e PC-6 Neiguan). Limitações a este estudo compreendem o fato de que a escolha dos acupontos explorados baseouse nas indicações terapêuticas descritas por Draehmpaehl e Zohmann (1994), em que o acuponto C-7 é indicado em casos de alterações funcionais do coração, e o acuponto PC-6 quando há dores miocárdicas. Ainda segundo os mesmos autores, essa forma de terapia alternativa objetiva normalizar funções orgânicas alteradas e, como no presente estudo foram utilizados animais hígidos, a acupuntura pode não ter promovido influência sobre a VFC nos cães que participaram do experimento. Limita-se, ainda, este estudo quando da observação das recomendações descritas por Scott (2001), quando ele destaca a necessidade de um ou dois tratamentos semanais durante quatro a seis semanas consecutivas, tempo em que se espera que possa haver a resposta desejada à terapia, fato não realizado no presente estudo. Finalmente, Kimura e Hara (2008) desenvolveram um estudo em que foram estudados os efeitos da eletroacupuntura sobre o ritmo do sistema nervoso autônomo em cães. Dentre outras análises, observaram o coeficiente de variação dos intervalos R-R (CVRR) do eletrocardiograma, o qual avalia o índice de atividade nervosa autônoma, de forma semelhante à VFC, a qual também se utiliza do intervalo R-R como unidade de medida. Seus até antes de 12 horas, 24 horas até antes de 72 horas aproximadamente de incubação, os valores foram superestimados. Subestimativas dos valores foram obtidas entre aproximadamente 12 horas às 24 horas e após 72 horas. Em nenhum momento os dados estimados foram iguais aos observados. Nas Fig. 2 e 3, apresentam-se a produção cumulativa de gases obtidos a partir dos dados observados e dos ajustados pelos dois modelos. Para estimativa da produção de gases, tanto o modelo logístico quanto o modelo de Gompertz podem ser utilizados, porém, de acordo com os parâmetros encontrados, o modelo logístico apresentou melhor valor de QME, critério que recomenda o seu uso. Com base nos gráficos de dispersões, pode-se verificar que tanto o modelo logístico como o Arq. Bras. Med. Vet. Zootec., v.63, n.1, p.136-142, 2011 139 Farias et al. Tempo de incubação (h) Figura 2. Curvas de produção cumulativa de gases da matéria seca do farelo e da torta de babaçu (Orbignya martiana) a partir da média dos dados observados e dos ajustados pelo modelo de Gompertz. Tempo de incubação (h) Figura 3. Curvas de produção cumulativa de gases da matéria seca do farelo e da torta de babaçu (Orbignya martiana) a partir da média dos dados observados e dos ajustados pelo modelo logístico bicompartimental. Barbosa (2007) obteve melhor ajuste para o modelo logístico em relação ao modelo de Gompertz, ao estudar a faveira e o pau-ferro. Azevedo (2007) encontrou, nos modelos logístico, exponencial e de France, ajuste adequado a todas as etapas do processo fermentativo, descrevendo as características de fermentação do material avaliado, tanto na fase inicial como na final. Na análise gráfica dos resíduos, o modelo logístico subestimou apenas no final da curva e superestimou no início. As curvas de produção de gases caracterizam-se por apresentar forma sigmoidal, podendo ser distinguidas três fases: inicial de baixa produção, fase exponencial de rápida produção e uma fase assintótica de lenta ou inexistente produção de gases (Noguera et al., 2004). Nas primeiras horas de fermentação, uma parte do substrato, geralmente os açúcares solúveis, é fermentada rapidamente, mas isto representa uma pequena porção do total a ser degradado. Na sequência, uma menor quantidade de alimento é hidratada e colonizada pela microbiota, dando origem a degradações distintas, dependendo do substrato, quanto aos constituintes solúveis e estruturais (Beuvink e Kogut, 1993). Giraldo et al. (2006), em estudo sobre a relação entre pressão e volume para a implantação da técnica in vitro de produção de gases, na Colômbia, obtiveram taxas de fermentação mais altas nas primeiras horas de incubação e atribuíram o fato à fermentação dos carboidratos solúveis, e também observaram grande diferença entre os alimentos estudados. Verificaram, ainda, que, entre seis e 12 horas de incubação, houve aumento na taxa de produção de gases, que foi atribuído à fermentação de carboidratos fibrosos ou estruturais. O QME, o R2 e o DMA dos modelos estudados para descrever a produção de gases oriundos da fermentação ruminal da FDN encontram-se na Tab. 3. Quanto ao QME, o modelo logístico bicompartimental foi o que apresentou menor valor. Os valores de R2 foram elevados (0,99) para os dois modelos. Os desvios médios absolutos diferiram entre os modelos, com o de Gompertz apresentando valor mais elevado. Azevedo (2007) obteve valores de R2 baixos para todos os modelos, sendo o menor valor para o de Gompertz. Schofield et al. (1994), ao compararem alguns modelos para descrever a cinética da digestão da fibra, obtiveram valores elevados de R2 para o logístico bicompartimental e o de Gompertz, com menor valor para o primeiro. 140 Arq. Bras. Med. Vet. Zootec., v.63, n.1, p.136-142, 2011 Avaliação dos modelos logístico. Tabela 3. Médias do quadrado médio do erro (QME), do coeficiente de determinação (R²) e do desvio médio absoluto (DMA) obtidas a partir dos ajustes dos dados de produção de gases da parede celular com os modelos logístico e de Gompertz Modelo QME R² DMA Logístico 6,39 0,99 1,98 de Gompertz 11,1 0,99 3,21 Nas Fig. 4 e 5, apresentam-se as produções cumulativas de gases obtidos a partir dos dados observados e dos ajustados pelos modelos de Gompertz e logístico bicompartimental para a FDN do farelo e da torta de babaçu. Figura 4. Modelo de Gompertz para o farelo e a torta de babaçu. Azevedo (2007) obteve melhor ajuste para o modelo logístico bicompartimental e exponencial do que para os de France e de Gompertz, no entanto utilizou o modelo de Gompertz, que, apesar de ter apresentado maior dispersão do resíduo, assim como valores mais elevados para QME e DMA, apresentou melhor estimativa para a curva de produção de gases. CONCLUSÕES O modelo logístico bicompartimental estimou os valores de produção de gases melhor do que o modelo de Gompertz. Desse modo, pode ser adotado na estimativa da cinética de fermentação ruminal da matéria seca e fibra em detergente neutro do farelo e da torta de babaçu. AGRADECIMENTOS Ao Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq), pela bolsa de estudo concedida e pelo apoio financeiro necessário à condução da pesquisa. Figura 5. Modelo logístico para o farelo e a torta de babaçu. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS AZEVEDO, M.M.R. 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